Давыдов В.Б.
Введение
- Парвовирус собак является основной причиной острого гастроэнтерита у молодых щенков и встречается по всему миру.
- Три антигенных варианта полностью вытеснили исходный штамм; их распространенность неоднородна и зависит от географического региона.
- Типичные клинические симптомы включают в себя рвоту, кровавую диарею и лейкопению; смертность в инфицированных питомниках и приютах для собак может достигать 60-70 %.
- Внутриклинические диагностические тесты обладают слабой чувствительностью, и может потребоваться проведение дополнительных тестов с использованием методов на основе ПЦР.
- Лечение в основном заключается в поддерживающей терапии, хотя было протестировано несколько противовирусных препаратов.
- Вакцинация щенков до сих пор остается наиболее эффективной стратегией контроля инфекции, несмотря на возможные помехи со стороны материнских антител и предположительное несоответствие вакцинных и полевых штаммов.
Парвовирус собак (CPV) — это небольшой безоболочечный вирус, который имеет сферическую форму. Он состоит из трёх белков: VP1, VP2 и VP3. Внутри вируса находится линейная одноцепочечная ДНК, которая кодирует два неструктурных (NS1 и NS2) и два структурных (VP1 и VP2) белка.
Основной белок капсида — это VP2, который является антигеном вируса. Недавно была проведена работа по пересмотру номенклатуры семейства парвовирусов (Parvoviridae), в результате чего CPV был выделен в отдельный вид Carnivore protoparvovirus 1. Вместе с вирусом панлейкопении кошек (FPLV) и другими родственными парвовирусами плотоядных, CPV представляет собой серьёзную угрозу для молодых собак.
Несмотря на то, что этот вирус известен с конца 70-х годов, он до сих пор представляет большую опасность для молодых собак. Это связано с тяжестью клинических симптомов и тем, что материнские антитела (МА) могут мешать активной иммунизации и негативно влиять на программу вакцинации. Ещё одним препятствием на пути к контролю над заболеванием является циркуляция полевых вариантов (CPV-2a, CPV-2b, CPV-2c), которые отличаются от исходного штамма CPV-2, до сих пор используемого в большинстве коммерческих вакцин. Хотя между CPV-2 и его антигенными вариантами есть лишь несколько незначительных аминокислотных различий, существует мнение, что вакцинация может обеспечить лишь частичную защиту, оставляя животных уязвимыми для инфицирования полевыми штаммами и развития заболевания.
Среди актуальных проблем, с которыми необходимо бороться, выделяются:
- повышенная частота заболеваемости у взрослых собак;
- способность антигенных вариантов заражать кошек, вызывая клинические симптомы, идентичные панлейкопении кошек.
В этой статье мы сосредоточимся на клинических, патологических и диагностических аспектах инфекции CPV, кратко обсудим текущую эпидемиологическую ситуацию в различных странах и предоставим обзор рекомендуемых протоколов вакцинации.
Эпидемиология
Исходный штамм CPV-2 появился в конце 1970-х годов и, вероятно, был вариантом штамма FPLV, ранее мутировавшим в неустановленном виде диких плотоядных животных. В начале 80-х годов исходный вирус был внезапно вытеснен двумя его антигенными вариантами, CPV-2a и CPV-26, образовавшимися посредством 5 или 6 аминокислотных замен в капсидном белке VP2, а третий вариант, CPV-2c, был отмечен в Италии в 2000 г.
В настоящее время исходный штамм CPV-2, до сих пор использующийся в большинстве вакцинных препаратов, в полевых условиях больше не циркулирует, в то время как три его антигенных варианта неравномерно распространены по всему миру. В континентальной Европе варианты, по-видимому, циркулируют совместно, с преобладанием типов 2а и 2Ь в Португалии, Франции и Бельгии, типов 2а и 2с в Италии, типа 2а в Восточной Европе и типа 2с на Иберийском полуострове, а в Германии одинаково распространены все три варианта вируса. В Северной и Южной Америке выявлена частая встречаемость CPV-2b/2c и CPV-2a/2c, соответственно; в Азии и в островных государствах, таких как Великобритания, Австралия и Япония, превалируют типы 2а и 2Ь. Немногочисленные отчеты из Африки указывают на совместную циркуляцию трех штаммов на севере континента и высокую встречаемость CPV-2a и 2Ь на юге.
CPV может инфицировать домашних собак, а также волков и другие дикие виды плотоядных, у которых часто выделяют вирусы, средние между CPV-2 и CPV-2a. Исходный штамм CPV-2 мог инфицировать клетки кошек in vitro, но не in vivo; в отличие от него новые антигенные варианты способны инфицировать кошек, вызывая заболевание, неотличимое от панлейкопении кошек. Теоретически предрасположенности к инфекции CPV не существует. Крупные породы, такие как немецкая овчарка, лабрадор-ретривер, ротвейлер, аляскинский маламут и доберман, по всей видимости, находятся в группе повышенного риска, но это может быть связано с тем, что уровень МА у быстро растущих щенков крупных пород снижается быстрее, чем у более мелких собак. Кроме того, хотя инфицирование CPV и соответствующая болезнь в основном встречается у щенков моложе 6 месяцев, отмечается возрастающее число случаев тяжелых клинических симптомов у взрослых собак, часто вызванных инфекцией CPV-2c.
Кал инфицированных щенков является основным источником вируса в окружающей среде; вирус крайне устойчив и может сохранять контагиозность на протяжении недель или даже месяцев. Щенки, не получавшие лекарственной терапии, инфицируются ороназальным путем посредством прямого или непрямого контакта.
Патогенез
Вирус, вызывающий коронавирусную болезнь птиц (CPV), размножается в основном в криптах кишечника и лимфоидных органах, хотя может распространяться на все ткани организма. После проникновения в тело животного CPV активно размножается в лимфоидной ткани ротоглотки, тимуса, брыжеечных лимфатических узлов и пейеровых бляшек, вызывая обширный некроз. Затем он проникает в кровоток, обычно через инфицированные лимфоциты.
Виремия (наличие вируса в крови) длится долго, и его можно обнаружить до 60 дней с помощью ПЦР в реальном времени. Колонизация в криптах тонкого кишечника, где активно реплицируется вирус, приводит к быстрому лизису стволовых клеток. Это нарушение обновления эпителиальных клеток кишечных ворсинок вызывает диарею.
Выделение вируса с калом начинается через 2-3 дня после инфицирования и продолжается до 45-50 дней. Однако высокие титры могут быть обнаружены только в первые 7-10 дней. У новорожденных щенков, возраст которых составляет всего 2-3 недели, canine parvovirus (CPV) способен размножаться в активно делящихся клетках миокарда, вызывая тяжёлый миокардит. Хотя в настоящее время такие случаи встречаются редко, они все же имеют место.
По сравнению с исходным штаммом CPV типа 2, антигенные варианты этого вируса отличаются более высокой патогенностью. Они имеют меньший инкубационный период, который составляет менее 4-5 дней, более тяжёлые клинические симптомы, а также выделяются на более высоком уровне и дольше. Кроме того, для инфицирования собак требуется меньшая концентрация вируса.
Если CPV развивается совместно с коронавирусом собак (CCoV), это может усугубить клинические проявления. CPV и CCoV поражают эпителий крипт и ворсинок кишечника, соответственно, что приводит к ухудшению состояния.
Клинические симптомы и патология
Как упоминалось ранее, инкубационный период исходного штамма CPV-2 составлял до семи дней, в то время как для новых вариантов характерно проявление клинических симптомов уже через три-четыре дня. В зависимости от возраста и состояния иммунной системы инфицированной собаки, инфекция CPV может проявляться в различных формах: от бессимптомного носительства до острого гастроэнтерита и, крайне редко, миокардита.
Бессимптомные инфекции
Бессимптомные инфекции чаще всего встречаются у щенков, которые обладают средним уровнем материнских антител (титры антител в реакции торможения гемагглютинации варьируются от 1:20 до 1:80). Эти антитела защищают щенков от явного заболевания, но не от инфицирования.
Уровни материнских антител могут различаться у щенков из одного помета, что объясняет, почему у некоторых из них развиваются тяжёлые клинические формы болезни, в то время как у других наблюдаются лишь незначительные симптомы или они полностью отсутствуют.
Взрослые собаки также могут быть заражены с проявлением некоторых клинических симптомов или бессимптомно из-за большей зрелости слизистых оболочек кишечника. Иногда наблюдаются лишь слабые симптомы, такие как летаргия и потеря аппетита в течение 2–3 дней, наряду с умеренной транзиторной лейкопенией.
Бессимптомные инфекции особенно опасны для питомников и приютов для животных, где присутствие здоровых, но инфицированных особей может привести к передаче вируса другим щенкам.
Гастроэнтеральная форма
Это наиболее распространённая форма, вызываемая инфекцией CPV у щенков в возрасте от одного до шести месяцев. Однако в последнее время наблюдается увеличение числа случаев заболевания среди взрослых собак.
После периода инкубации, который длится от 3 до 4 дней, у щенков появляются такие симптомы, как потеря аппетита, угнетённое состояние и рвота. За рвотой следует диарея, которая может привести к сильному обезвоживанию.
Диарея часто бывает кровавой, с прожилками крови или тёмно-красного цвета из-за наличия крови в стуле. Температура может повышаться до 40-41 °С, хотя это не всегда наблюдается.
Лейкопения, то есть снижение уровня лейкоцитов ниже 2000-3000 клеток/мкл, является распространённым симптомом. Однако важно отметить, что в случае вирусной лейкопении с сопутствующей нейтрофилией, вызванной оппортунистической бактериальной инфекцией, абсолютное содержание лейкоцитов может быть в норме. Эти бактерии часто усугубляют клиническое течение болезни, вызывая дополнительные симптомы, которые могут привести к гибели животного, такие как угнетение дыхания. Степень лейкопении является важным прогностическим фактором. Было установлено, что у щенков с уровнем лейкоцитов ниже 1000 клеток/мкл шансы на выживание крайне малы. Смерть может наступить уже через два дня после появления клинических симптомов в результате распространения бактерий или диссеминированного внутрисосудистого свертывания крови.
Уровень смертности может значительно различаться в зависимости от возраста и состояния иммунной системы животного. У взрослых собак смертность обычно составляет менее 1%.
Щенки, погибшие от парвовирусного энтерита, были сильно обезвожены. При вскрытии обнаруживались обширные повреждения желудочно-кишечного тракта, которые в основном затрагивали двенадцатиперстную и тощую кишку. Наиболее распространённым типом поражения был геморрагический гастроэнтерит.
Стенки кишечника были утолщены, с бледными участками, а серозная поверхность могла быть темно-красной или пурпурной, иногда покрытой фибрином. Кишечник мог быть пустым или содержать тёмную, часто кровавую массу или геморрагическую жидкость.
Мезентериальные лимфатические узлы и пейеровы бляшки были увеличены и набухшими, часто с множественными кровоизлияниями на поверхности разреза. При гистопатологическом исследовании тонкого кишечника выявлялся многоочаговый некроз крипт и внутриядерные тельца-включения. В пейеровых бляшках, лимфатических узлах, селезёнке и тимусе наблюдалось значительное истощение лимфоцитов.
Если возникали бактериальные осложнения, то могли наблюдаться отёк лёгких и альвеолит.
Миокардиальная форма
Миокардиальная форма парвовирусного энтерита характеризуется поражением сердечной мышцы.
Во время первой масштабной вспышки парвовирусной инфекции (CPV), которая охватила весь мир, острый миокардит был частым заболеванием у собак, ранее не сталкивавшихся с этим вирусом. Однако в настоящее время в естественной среде эта форма болезни встречается лишь изредка.
Парвовирусный миокардит может развиваться только у щенков в возрасте до 3-4 недель, когда клетки сердечной мышцы активно делятся и не защищены от проникновения вируса. Однако сегодня благодаря тому, что большинство сук были вакцинированы или уже сталкивались с вирусом и выработали стойкий иммунитет, практически все щенки получают материнские антитела, которые защищают их от парвовирусной инфекции в первые недели жизни.
Парвовирусный миокардит — это опасное заболевание, которое может привести к внезапной смерти у щенков. В некоторых случаях перед смертью у животного могут наблюдаться проблемы с желудочно-кишечным трактом, а также короткие приступы одышки, вокализации и рвоты.
Однако, у некоторых собак парвовирусный миокардит может протекать бессимптомно, и патология сердца может быть обнаружена только на электрокардиограмме. В таких случаях вирус предрасполагает собаку к развитию дегенеративных заболеваний сердца, и через несколько недель или месяцев может возникнуть сердечная недостаточность.
У щенков, которые смогли восстановиться после парвовирусного миокардита, может развиться фиброз миокарда. У собак, умерших от миокардиальной формы болезни, часто наблюдается хорошая физическая форма, и иногда единственным признаком, выявленным при вскрытии, является отек легких. В других случаях на поверхности поражённого сердца можно обнаружить дряблость стенок и расширение его камер, а также бледные очаги некроза. Гистопатологические изменения в миокарде проявляются в виде негнойного миокардита, многоочаговой инфильтрации лимфоцитами и плазмоцитами, а также наличием внутриядерных телец включения.
Диагностический подход
Постановка диагноза инфекции CPV зачастую основана просто на присутствии зловонной и кровавой диареи, но следует подчеркнуть, что сходными симптомами могут обладать и другие патогены, и что парвовирусный энтерит часто протекает без геморрагии. Таким образом, во всех случаях требуется лабораторная диагностика либо для подтверждения, либо для исключения инфекции CPV.
Клиническая диагностика
Рвота и диарея с примесью крови, сопровождающиеся острой лейкопенией, могут свидетельствовать о наличии инфекции CPV. Однако необходимо провести дифференциальную диагностику, чтобы исключить другие заболевания, такие как чума собак, инфекционный гепатит собак, кишечные паразитозы и другие нарушения пищеварения.
CCoV (Canine Coronavirus) обычно вызывает энтерит без кровотечений, но при определённых условиях может вызывать диарею с примесью крови. Высокопатогенные штаммы (пантропный CCoV) могут вызывать системное заболевание и лейкопению.
Для вирусологической диагностики можно использовать методы прямого обнаружения вируса в кале больных собак или тканях при аутопсии (кишечник, селезёнка, лимфатические узлы). На более поздних стадиях инфекции наиболее информативным образцом является кровь, так как в этот период наблюдается длительная виремия. Высокие уровни вируса обнаруживаются во всех тканях, включая мозг, но максимальные титры выявляются в лимфоидных тканях.
Для выявления CPV в кале существует ряд коммерческих наборов для внутрилабораторного анализа. Эти тесты позволяют обнаруживать все три антигенных варианта вируса, а также родственный вирус панлейкопении кошек. Однако они имеют низкую чувствительность и могут пропускать до 50-60% образцов, содержащих CPV, особенно на поздних стадиях инфекции, когда вирус выделяется с калом в небольших количествах, или когда высокие титры антител CPV в кишечнике подавляют производство жизнеспособного вируса.
Реакция гемагглютинации и выделение вируса могут проводиться только в специализированных лабораториях и не обеспечивают существенно более высокую чувствительность по сравнению с внутрилабораторным тестированием.
В то же время, методы на основе ПЦР, которые обнаруживают вирусную ДНК, обладают высокой чувствительностью и должны использоваться, по крайней мере, при наличии серьёзных подозрений на парвовирус, но при отрицательном результате внутрилабораторного тестирования щенка. Кроме того, ПЦР-тесты разработаны таким образом, чтобы отличать вакцинные вирусы от полевых вариантов CPV, что может быть полезно для разрешения споров между владельцами, ветеринарными врачами и производителями вакцин в случае возникновения диареи у собаки через несколько дней после вакцинации от CPV.
Доступные на рынке вакцины содержат модифицированные живые вирусы, которые размножаются в эпителии кишечника вакцинированных собак. Вирус выделяется с калом (хотя и в низких титрах) и в течение более короткого периода времени, чем полевые штаммы. Это может привести к ложноположительному результату при выявлении CPV в кале вакцинированных собак и ошибочной постановке диагноза. В то же время клинические симптомы могут быть вызваны другими энтеропатогенами.
ПЦР-анализ может быть полезен для опровержения предположений о развитии вирулентности вакцинного штамма, если у животного после вакцинации развивается острый гастроэнтерит.
Несмотря на наличие ряда тестов, серологическое исследование не является диагностическим методом. В действительности, специфические антитела в сыворотке крови могут не быть связаны с активной инфекцией CPV, если животное ранее было вакцинировано против данного вируса или имело с ним контакт.
Тем не менее, серологическое исследование может быть полезным для оценки иммунологического статуса животного в отношении CPV до и после вакцинации, а также для определения снижения уровня материнских антител с целью определения оптимального времени для вакцинации щенка без влияния материнских антител.
Кроме того, серологическое исследование позволяет определить, сформировался ли у животного иммунный ответ на вакцинацию. Наиболее часто используемым методом серологического исследования является реакция торможения гемагглютинации (HI), которая требует наличия квалифицированного персонала и специальных материалов. Однако только реакция нейтрализации вируса (VN) позволяет обнаружить защитные антитела и широко применяется для оценки перекрестной нейтрализации вакцинного и полевого вирусов.
Лечение
Несмотря на неспецифический характер терапии, она часто оказывает положительное влияние на уровень смертности при инфекциях, вызванных CPV. Основная цель терапии при парвовирусном энтерите — восстановить уровень жидкости и водно-электролитный баланс, а также предотвратить развитие сопутствующей инфекции, вызванной оппортунистическими бактериями.
Внутривенная инфузионная терапия раствором Рингера с добавлением глюкозы и калия помогает нейтрализовать гипогликемию и гипокалиемию. Если нет возможности регулярно контролировать уровень электролитов и глюкозы в сыворотке крови, можно эмпирически добавлять в/в жидкости с хлоридом калия (20–40 мЭкв/л) и декстрозой (2,5–5 %).
Парентеральные противорвотные препараты, такие как хлорпромазин, ацепромазин, прохлорперазин, метоклопрамид, ондансетрон, доласетрон и маропитант, могут снизить потерю жидкости и стресс у пациента, что облегчит энтеральное питание. Однако следует учитывать, что применение α-адреноблокаторов может усилить гипотензию у щенков с гиповолемией, а прокинетики могут повысить риск инвагинации кишечника.
Гастропротекторные средства и блокаторы Н2-гистаминовых рецепторов, такие как циметидин и ранитидин, могут оказывать благоприятное воздействие.
Для профилактики и лечения вторичных инфекций рекомендуется применять противомикробные препараты широкого спектра действия.
Для контроля грамотрицательных аэробных и анаэробных бактериальных инфекций, которые часто вызывают осложнения при парвовирозе собак, рекомендуется использовать комбинацию пенициллина и аминогликозидных антибиотиков.
Для пациентов с нефропатией предпочтительно использовать цефалоспорины третьего поколения вместо нефротоксичных аминогликозидов. Также следует избегать применения хинолонов для растущих собак. Если рвота у щенка прекратилась на 12–24 часа, не рекомендуется препятствовать ему в приёме пищи и воды. Существуют данные, свидетельствующие о том, что животные, получавшие легкоусвояемый промышленный или домашний корм, быстрее восстанавливаются.
Щенков с анорексией необходимо кормить через назогастральный или назоэзофагеальный зонд. Переливание цельной крови или плазмы может помочь восполнить потерю крови и белка, вызванную тяжёлым энтеритом.
Препарата с доказанной эффективностью в отношении инфекции, вызванной CPV, на данный момент не существует.
Введение гипериммунной плазмы или очищенных иммуноглобулинов может быть целесообразным в качестве профилактической меры для щенков, которые контактируют с инфицированными животными. Однако на данный момент нет достаточных данных, подтверждающих эффективность такой терапии для больных щенков.
К моменту появления клинических симптомов вирус уже колонизировал целевые ткани, и уровень антител в организме уже высок.
Некоторые препараты, такие как рекомбинантный гранулоцитарный колониестимулирующий фактор человека или собак, могут сократить продолжительность госпитализации и повысить уровень выживаемости. Однако для подтверждения их эффективности необходимы дополнительные исследования.
За последние годы был проведён ряд исследований противовирусных препаратов для лечения инфекции CPV. Одним из потенциальных кандидатов является противогриппозный препарат озельтамивир. Однако необходимы дополнительные исследования для подтверждения его эффективности. Исследования показали, что применение рекомбинантного интерферона-α у кошек снижало интенсивность клинических симптомов и смертность только в том случае, если лечение начиналось в ближайшее время после инфицирования. Однако в реальной ситуации такое условие трудно воспроизвести.
Хотя результаты тестов подтверждают продолжительное выделение инфекционного вируса с калом, маловероятно, что он будет выделяться более 7-10 дней. Однако, благодаря отсутствию оболочки, вирус обладает исключительной устойчивостью, что затрудняет его уничтожение в окружающей среде, где он может сохраняться на протяжении нескольких недель или месяцев, приводя к дальнейшему распространению инфекции.
В связи с этим необходимо обеспечить строгую изоляцию инфицированных щенков и провести тщательную дезинфекцию. Каловые массы должны быть удалены как можно быстрее, так как они являются основным источником вирусной контаминации окружающей среды.
Наиболее распространённые дезинфектанты не способны инактивировать вирус, однако доказана эффективность 5-10% раствора гипохлорита натрия. Все поверхности, которые могут быть обработаны, должны быть замочены в растворе хлорной извести в течение не менее 10 минут, особенно это касается конуры и больничных клеток, сильно загрязнённых калом. Поверхности, которые не выдерживают воздействия хлорной извести, необходимо обрабатывать паром для дезактивации.
Вакцинация
Влияние материнских антител
Основной проблемой при вакцинации CPV является наличие материнских антител, которые защищают щенков от инфицирования полевыми штаммами, но препятствуют активной иммунизации.
Титры материнских антител зависят от уровня антител в сыворотке крови матери и объёма потреблённого щенками молозива. В связи с этим, щенки от одной и той же суки могут иметь различные уровни материнских антител и, следовательно, могут быть подвержены инфекции CPV (и активной иммунизации) в разном возрасте.
Вакцинация щенков с высоким уровнем материнских антител (титры HI> 1:20) может привести к недостаточной сероконверсии из-за разрушения вакцинного вируса антителами молозива. Поскольку только титры HI> 1:80 считаются защитными от инфекции полевыми штаммами, существует так называемое «окно восприимчивости» — период, обычно длящийся 2–3 недели, в течение которого щенков нельзя вакцинировать, но при этом они могут быть инфицированы с последующим развитием болезни.
Для предотвращения интерференции при активной иммунизации, вакцины должны вводиться щенкам только после исчезновения материнских антител.
Для преодоления интерференции материнских антител рекомендуется использовать различные стратегии вакцинации, включая вакцины с высоким титром и интраназальную вакцинацию.
Повторное интраназальное введение моновалентных вакцин CPV было эффективно для уничтожения вируса в инфицированных питомниках.
Согласно рекомендациям Всемирной ассоциации ветеринаров, курс первичной вакцинации от CPV должен заканчиваться не ранее 14-16 недель для обеспечения защиты щенков с длительным действием материнских антител.
Рекомендуемый протокол включает три введения вакцины CPV в первый год жизни и последующую ревакцинацию один раз в три года.
Вакцины CPV-2 обеспечивают перекрёстную защиту от антигенных вариантов.
Хотя окно восприимчивости является основной причиной активного распространения CPV среди вакцинированных животных, существуют сомнения в полной эффективности вакцин на основе CPV 2-го типа против новых антигенных вариантов вируса.
Большинство коммерческих вакцин готовятся с использованием старого штамма CPV-2, который больше не циркулирует в природе. Исследования подтвердили, что антитела, выработанные против вакцинного вируса, не способны полностью нейтрализовать полевые штаммы CPV.
Существует несколько лицензированных вакцин, содержащих вариант CPV-2b. Было бы желательно иметь вакцинные препараты с новым вариантом 2с. Однако все три варианта способны обеспечивать эффективную перекрестную нейтрализацию.
